Jorge Bolívar Pérez
Manuel J. Martínez Valdivia
Manuela Ortiz Santesteban
Carlos Pendón Meléndez
Antonio Astola González
Mª Isabel Arufe Martínez
Manuela de Jesús Moreno Brea
Juana María Arellano López

Familiarizar al alumno con tecnicas de interes en el campo de la bioquimica y
la biologia molecular asi como de la toxicologia. Estas tecnicas constituyen
en
cada caso herramientas de uso rutinario en laboratorios de diagnosis siendo
algunas de las practicas a realizar metodos aceptados para la cuantificacion
de
diversas moleculas de interes bioquimico o toxicologico.

I. PROGRAMA TEÓRICO
1. ANÁLISIS BIOQUÍMICO DE AZÚCARES EN UNA MUESTRA.
Análisis de glúcidos. Reacciones de oxidación-reducción. Reacción de Tollens.
Reacción de Fehling. Reacción de Somogyi-Nelson. Método de la glucosa
oxidasa/peroxidasa. Purificación de azúcares por cromatografía de afinidad y
electroforesis. Caracterización de oligosacáridos:análisis por metilación.
Secuenciación de oligosacáridos: glucosidasas. Los oligosacáridos como
marcadores biológicos.
2. PLEGADO Y ESTABILIDAD DE LAS PROTEÍNAS
Estructura tridimensional de las proteínas. Proteínas globulares: estructura
terciaria y diversidad funcional. Factores que determinan la estructura
terciaria. Termodinámica del plegado.Dinámica de la estructura de las
proteínas
globulares. Predicción de la estructura proteica.Estructura cuaternaria de las
proteínas. Interacciones proteína-proteína.
3. TÉCNICAS EXPERIMENTALES EN EL ESTUDIO DE PROTEÍNAS
Solubilidad, purificación y cuantificación de proteínas. Análisis
electroforético. Análisis por cromatografía. Análisis de aminoácidos y
determinación de N y C terminales. Secuenciación y síntesis de péptidos.
Degradación enzimática de proteínas. Análisis inmunológicos. Ensayos
funcionales.
4. CINÉTICA DE LA CATÁLISIS ENZIMÁTICA.
Concepto de enzima. Cinética de las reacciones catalizadas enzimáticamente.
Cinética de Michaelis-Menten. Cálculo de la actividad enzimática. Definición
de
unidad de actividad enzimática. Factores que influyen en la actividad
enzimática. Inhibición enzimática. Clasificación de los enzimas. Coenzimas y
Vitaminas.
5. DETERMINACIÓN DE BIOMOLÉCULAS CON INTERÉS EN CLÍNICA.
Colesterol: estructura y función. Biosíntesis de colesterol. Regulación.
Dinámica del colesterol plasmático. Acidos biliares y excreción del
colesterol.
Aterosclerosis. Creatina y creatinina.Función y síntesis de creatina. Creatina
kinasa: aplicación clínica y distribución tisular. Reacción espontánea de
formación de creatinina. Determinación de creatinina en orina.
orina.
6. INTRODUCCIÓN A LA TOXICOLOGÍA
Definición. Ramas de la Toxicología. Tóxico y toxicidad. Tipos de efectos
tóxicos. Relación dosis-respuesta;concepto y representación; dosis letal
media.
Factores que modifican la toxicidad.
7. FASES DEL PROCESO TÓXICO
Esquema general. Vías de absorción de tóxicos en el organismo. Distribución y
almacenamiento.Biotransformación; destoxicación y bioactivación. Vías de
excreción. Mecanismos de toxicidad; reacciones de iniciación con dianas.
Biomarcadores.
8. ANÁLISIS TOXICOLÓGICO
Modalidades y fases del análisis toxicológico. La muestra en el análisis
toxicológico. Clasificación de los tóxicos conforme a los procedimientos de
análisis. Separación de tóxicos gaseosos y volátiles; técnicas clásicas;
espacio en cabeza. Separación de tóxicos inorgánicos. Separación de
tóxicos orgánicos; extracción líquido-líquido; extracción en fase sólida.
9. IDENTIFICACIÓN Y DETERMINACIÓN DE TÓXICOS
Pruebas preliminares, técnicas de confirmación y técnicas de cuantificación.
Tests colorimétricos. Pruebas de microcristales. Inmunoensayos. Técnicas
cromatográficas.
10. INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOS EN TOXICOLOGÍA
Problemas asociados. Urianálisis de drogas de abuso.

PROGRAMA PRACTICO
PRÁCTICA Nº 1
Análisis bioquímico de azúcares en una muestra: método de Nelson-Somogyi y
método de la glucosa oxidasa/peroxidasa.
PRÁCTICA Nº 2
Cinética enzimática: cálculo de las constantes cinéticas de una reacción
enzimática.
PRÁCTICA Nº 3
Análisis bioquímico de proteínas: cuantificación de proteínas por el método de
Lowry.
PRÁCTICA Nº 4
Análisis bioquímico de proteínas: separación de proteínas por electroforesis
en
geles de poliacrilamida.
PRÁCTICA Nº 5
Análisis de biomoléculas con interés en clínica: determinación de colesterol y
creatinina.
PRÁCTICA Nº 6
A.  Estimación de la Dosis Letal Media.
B.  Búsqueda de información toxicológica en Internet.
PRÁCTICA Nº 7
Pruebas preliminares para el cribado de sustancias tóxicas en muestras
biológicas: Identificación de benzodiacepinas por cromatografía en capa fina
previa extracción líquido-líquido.
PRÁCTICA Nº 8
Análisis cuantitativo de tóxicos en muestras biológicas:
A.  Determinación de salicilatos en orina
B.  Determinación de tiocianato en saliva
C.  Determinación de ácido hipúrico en orina como indicador de exposición
al tolueno.
D.  Determinación de la alcoholemia por cromatografía gas-líquido. Método
del espacio de cabeza.
PRÁCTICA Nº 9
Estudio de biomarcadores de respuesta (o efecto):
A.  Evaluación de la peroxidación lipídica: test del ácido tiobarbitúrico.
B.  Determinación de la inhibición de las colinesterasas plasmáticas por
insecticidas organofosforados.
C.  Determinación de ácido delta-aminolevulínico como biomarcador de
exposición al plomo.
PRÁCTICA Nº 10
Química forense:
A.  Identificación de cannabinoides en preparaciones de Cannabis sativa.
B.  Identificación de manchas de sangre.

1. Seminarios de apoyo. Antes de comenzar el trabajo experimental en el
laboratorio se impartirán una serie de seminarios distribuidos en 10 sesiones.
En ellos se explicarán los aspectos teóricos contenidos en el programa de la
asignatura y aquellos experimentales cuyo conocimiento se considere necesario
antes de comenzar el trabajo de laboratorio.
2. Actividad en el laboratorio. Se realizarán 10 prácticas en el laboratorio,
que pueden constar de varias partes independientes, distribuidas en DIEZ
sesiones.

1. Asistencia y realización de las prácticas. La asistencia a las sesiones
prácticas es obligatoria. Faltas reiteradas e injustificadas al laboratorio
serán, de acuerdo con la normativa en vigor, motivo de suspenso. Se valorará
la
actitud del alumno en el laboratorio, pulcritud en la realización de los
experimentos, cuidado en el manejo del
material y del instrumental, conocimiento de los objetivos de la práctica y
fundamento de las manipulaciones que se realicen.
2. Memoria de la actividad en el laboratorio. Cada alumno deberá entregar una
Memoria escrita de las actividades realizadas en el laboratorio. Al comienzo
de
cada sesión práctica se informará acerca del contenido que deberá plasmarse en
la Memoria sobre la práctica realizada: resultados obtenidos y discusión de
los
mismos,responder a una serie de cuestiones o la resolución de una muestra
problema. La fecha límite para entregar la Memoria se comunicará con
antelación. La calificación de la Memoria contabilizará un 50 % de la nota
final de la asignatura.
3. Examen final (Convocatoria Ordinaria de junio y Convocatorias
Extraordinarias). Se realizará un examen escrito compuesto por varias preguntas
relativas a las prácticas realizadas y a los seminarios de apoyo de las
mismas.
En las Convocatorias Extraordinarias será igualmente imprescindible haber
presentado la Memoria. Las fechas de los exámenes de la convocatoria de junio
serán anunciadas por el Decanato. La calificación del examen contabilizará un
50 % de la nota final de la asignatura.

BIOQUIMICA
1. ANÁLISIS BIOQUÍMICO DE AZÚCARES EN UNA MUESTRA
Concepto y clasificación de los glúcidos (Mathews Cap. 9, p. 311-347).
Monosacáridos:ej. la glucosa (Mathews Cap. 9, p. 311-323).
Oligosacáridos: ej. los grupos sanguíneos (Mathews Cap. 9, p. 328-332, 345).
Polisacáridos: ej. glucógeno, almidón, celulosa (Mathews Cap. 9, p. 3332-337).
Homeostasis de la glucosa: ¿cómo se mantiene la concentración de glucosa en
sangre?.
La diabetes (Devlin Cap. 13, p. 536-539;Anderson Cap. 9, p. 148-150).
Análisis cuantitativo de la glucosa. Métodos químicos y métodos enzimáticos.
Reacción de Somogyi-Nelson. Método de la O-toluidina. Método de la glucosa
oxidasa/peroxidasa (Anderson Cap. 9, p. 157-160).
2. PLEGADO Y ESTABILIDAD DE LAS PROTEÍNAS
Estructura tridimensional de las proteínas. Proteínas globulares: estructura
terciaria y diversidad funcional. Factores que determinan la estructura
terciaria. Termodinámica del plegado. Dinámica de la estructura de las
proteínas globulares. Predicción de la estructura protéica. Estructura
cuaternaria de las proteínas. Interacciones proteína-proteína.
(Garret & Grisham Cap. 4 y 5, p. 81, 179; Voet & Voet Cap. 4, 6, 7, 8, p. 61,
226; Zubay Cap. 3, 4, p. 47-105; Mathews van Holde Cap. 5, 6, p. 141-231)
3. TÉCNICAS EXPERIMENTALES EN EL ESTUDIO DE PROTEÍNAS
Solubilidad, purificación y cuantificación de proteínas (Voet & Voet Cap. 5,
p.80-86).
Análisis electroforético (Voet & Voet Cap. 5, p.100-107). Análisis por
cromatografía (Voet & Voet Cap. 5, p. 86-100). Análisis de aminoácidos y
determinación de N y C terminales. Secuenciación y síntesis de péptidos.
Degradación enzimática de proteínas (Stryer Cap. 3, p.50-57, 64-67). Análisis
inmunológicos. Ensayos funcionales (Stryer Cap.3, p. 62-64)
4. CINÉTICA DE LA CATÁLISIS ENZIMÁTICA
Catálisis enzimática (Rawn Cap.7, p. 149-165). Factores que influyen en la
actividad enzimática (Anderson Cap.14, p. 244-247). Cinética de Michaelis-
Menten. Significado de las constantes KM, Kcat y Kcat / KM (Mathews Cap. 11,
p.
403-434; Voet & Voet Cap.13,p. 365-367; Stryer, 5e, p. 200-203). Inhibición
enzimática (Rawn Cap.7, p.166-184).
Determinación de la actividad enzimática. Cálculo de la actividad enzimática
(Anderson Cap. 14 p. 247-250). Reacciones apareadas. Isoenzimas (Anderson Cap.
14 p. 250).
Clasificación de los enzimas (Anderson Cap. 14 p. 251; Mathews Cap. 11 p. 438-
441;Devlin Cap. 4, p. 129-133).
5. LOS ENZIMAS EN EL DIAGNÓSTICO CLÍNICO
Factores que afectan a la actividad enzimática en plasma o suero (Herrera Cap.
7, p.159-160). Selección del ensayo enzimático para el diagnóstico (Herrera
Cap. 7, p. 160-163). Los enzimas como reactivos en el laboratorio clínico
(Herrera Cap. 7, p. 163-166;Anderson Cap. 14, p. 250). Colesterol: estructura
y
función (Mathews Cap. 18, 684-697).
Dinámica del colesterol plasmático (Herrera Cap. 24, p. 645-651; Devlin Cap.
10, p.517-518). Acidos biliares y excreción del colesterol (Herrera Cap. 24,
p.
660-665; Devlin Cap. 10, p. 518-520). Aterosclerosis (Devlin Cap. 10, p. 517;
Voet & Voet Cap. 11, p.332-335). Determinación de colesterol en plasma.
Creatina y creatinina. Función y síntesis de creatina (Herrera Cap.30, p.864-
865). Creatina kinasa: aplicación clínica y
distribución tisular (Anderson Cap. 14, p. 259-263; Devlin Cap. 4, p. 205-207;
Devlin Cap. 21, p. 1030). Reacción espontánea de formación de creatinina.
(Devlin Cap. 12, p.604-606). Determinación de creatinina en orina.

TOXICOLOGIA
1. ANDERSON “Bioquímica Clínica” Ed. Interamericana ( 1ª ed.) 1993
2. DEVLIN “Bioquímica: libro de texto con aplicaciones clínicas” Ed. Reverté .
(3ªed.) 1999
3. GARRET & GRISHAM “Biochemistry” Ed. Saunders College Publishing. (1ª ed.)
1995
4. HERRERA “Bioquímica: aspectos estructurales y vías metabólicas” Ed.
Interamericana. (2ª ed.) 1991
5. MATHEWS VAN HOLDE “Bioquímica” Ed. Addison-Wesley. (3ª ed.) 2002
6. RAWN “Bioquímica” Ed. Interamericana (1ª ed.) 1989
7. STRYER “Bioquímica” Ed. Reverté. 5ª ed.) 2003
8. VOET & VOET “Bioquímica” Ed. Omega. (1ª ed) 1995
9. ZUBAY “Biochemistry” Ed. WCB. (3ª ed.) 1993
SEMINARIOS DE TOXICOLOGÍA
Ver Temas 6-10 del Programa Teórico
BIBLIOGRAFÍA
1. Berman E. (1996) The Laboratory Practice of Clinical Toxicology. Charles C
Thomas Pub Ltd.
2. Bradenberger H., Maes R.A.A. (1997) Analytical toxicology for clinical,
forensic and pharmaceutical chemists. Walter de Gruyter.
3. Chamberlain J (1995) The Analysis of Drugs in Biological Fluids. CRC Press.
4. Cole MD, Caddy B (1995) The analysis of Drugs of Abuse: An Instruction
Manual. Ellis Horwood.
5. Klaassen C.D. (1996) Cassaret and Doull´s Toxicology. The Basic Science of
Poisons.
6. Klaassen, C.D. (2001) Casarett & Doull. Manual de Toxicología. Mc Graw Hill.
2001.
7. Levine B. (1999) Principles of Forensic Toxicology. American Association for
Clinical Chemistry, Inc.
8. Liu RH, Gadzala DE (1997) Handbook of Drug Analysis. Applications in
forensic
and clinical laboratories. A.Ch.Soc.
9. Moffat AC (1986) Clarke´s Isolation and identification of drugs in
pharmaceuticals, body fluids and postmortem material. The Pharmaceutical
Press.
10. Niesink R.J.M., De Vries J., Hollinger M.A. (1996) Toxicology. Principles
and Applications. CRC Press.
11. Repetto M (1997) Toxicología Fundamental. Ed. Científico Técnica.
12. Wong S.H.Y., Sunshine I. (1997) Handbook of Analytical Therapeutic Drug
Monitoring and Toxicology. CRC Press.